1、准备工作

 

　　环境准备：

 

　　温湿度控制：确保实验室温度和湿度处于适宜范围。大多数仪器要求室温稳定在20-25°C之间，相对湿度不超过70%。

 

　　清洁桌面：实验台面应保持干净整洁，避免灰尘和其他杂质干扰样品或试剂的纯净性。

 

　　试剂准备：

 

　　校准标准品：根据实验需求准备好一系列已知浓度的标准品，用于建立标准曲线，从而准确计算未知样品中的蛋白质浓度。

 

　　新鲜配制试剂：所有使用的缓冲液、酶溶液等均应按照说明书的要求新鲜配制，并且注意保存条件以维持其活性。

 

　　2、样品处理与加载

 

　　样品预处理：

 

　　离心分离：对于含有细胞碎片或其他颗粒物的样品，需先进行离心处理，取上清液作为待测样品，减少非特异性结合的可能性。

 

　　稀释调整：如果样品浓度过高超出检测范围，则需要适当稀释，通常建议稀释倍数为1:10至1:100不等。

 

　　样品加载：

 

　　微量移液器操作：使用微量移液器时要轻柔且均匀地吸取和释放液体，避免产生气泡影响吸光度或荧光信号。

 

　　加样顺序：遵循从低浓度到高浓度的标准品依次加入微孔板中，最后添加待测样品，有助于减少交叉污染的风险。

 

　　3、仪器设置与运行

 

　　参数设定：

 

　　波长选择：根据所用检测方法的不同，设定合适的激发和发射波长。例如，在进行Bradford法测定蛋白质浓度时，通常选择595nm作为检测波长。

 

　　时间程序：设置适当的孵育时间和读数间隔，保证反应充分进行的同时也能捕捉到动态变化过程。

 

　　启动检测：

 

　　预热仪器：在正式开始实验前，提前开机并让仪器预热一段时间（一般为15-30分钟），使内部元件达到稳定状态。

 

　　确认无误后启动：检查所有设置无误后，点击“开始”按钮执行检测任务，期间不要随意中断以免影响数据完整性。

 

　　4、数据分析与报告生成

 

　　数据分析：

 

　　绘制标准曲线：利用软件自动或手动输入标准品浓度及其对应的吸光度值，生成标准曲线图。通过拟合方程计算出斜率和截距，进而推算出未知样品的实际浓度。

 

　　异常点剔除：观察数据分布情况，若发现个别偏离较大的点，需重新检验该样本以确认是否存在操作失误或样品本身的问题。

 

　　报告生成：

 

　　格式规范：整理实验结果，撰写详细的实验报告。内容应包括实验目的、材料方法、主要发现以及结论。确保所有图表清晰可读，便于他人理解。

 

　　存档备份：定期备份原始数据文件，防止因意外断电或硬盘故障导致数据丢失。建议将重要数据存储在多个位置，增加冗余度。